С 1972 по 1974 год служил в Советской Армии. В 1978 году получил диплом Харьковского юридического института (в настоящее время Национальный юридический университет имени Ярослава Мудрого). В период 1978–1983 гг. работал в прокуратуре Кореновского района Краснодарского края.
В 1983 году был назначен на должность заместителя прокурора Динского района Краснодарского края. В 1983–1985 годах служил прокурором Гулькевичского района Краснодарского края. С 1985 по 1992 год занимал должность прокурора Хостинского района г. Сочи.
В период 1992–1994 гг. Устинов был прокурором г. Сочи. С 1994 по 1997 год занимал должность первого заместителя прокурора Краснодарского края. В 1997 году был переведен в Москву, где получил пост заместителя генерального прокурора России.
В 1998–1999 гг. руководил главным управлением Генеральной прокуратуры Российской Федерации по надзору за исполнением законов о федеральной безопасности и межнациональных отношениях. С 1999 по 2000 год был исполняющим обязанности генерального прокурора России.
Весной 2000 года занял должность генерального прокурора РФ, был избран членом Совета Безопасности России. В 2002 году защитил кандидатскую диссертацию, в 2003 году получил степень доктора юридических наук.
В 2006–2008 гг. Устинов занимал должность министра юстиции. В 2008 году был направлен на работу в качестве полномочного представителя президента РФ в Южный федеральный округ (ЮФО). В 2012 году состоялось переназначение Устинова на должность полпреда президента в Южном федеральном округе. С 2016 года был полномочным представителем президента расширенного и объединенного ЮФО. В июне 2018 года переназначен на должность полномочного представителя президента России в ЮФО. В апреле того же года был включен в санкционный «Кремлевский список» США в числе 17 чиновников и 7 бизнесменов из России, приближенных к Владимиру Путину.
Согласно
декларации о доходах и имуществе, в 2018 году Владимир Устинов с супругой заработали около 15 млн рублей, в их собственности находятся три автомобиля и мотоцикл. Владимиру Устинову также принадлежит квартира площадью около 150 кв. м, четыре земельных участка общей площадью 12 тыс. кв. м и три дома.
Является действительным государственным советником юстиции, заслуженным юристом России. Обладатель двух орденов Мужества и орденов «За заслуги перед Отечеством» третьей и четвертой степени.